Proiect 111/2006
Denumire modul I SANATATE
Titlu Abordarea complexa, celulara, moleculara si genetica a unor noi mecanisme patogenice in mieloproliferarile maligne.
Director de proiect Conf. Dr. Eugen Mihail Hinescu
Parteneri

Universitatea de Medicina si Farmacie "Carol Davila"; Spitalul Clinic Coltea; Institutul de virusologie "Stefan Nicolau"; Catedra de Medicina Moleculara, UMF "Carol Davila".

Date de contact genetica@vbabes.ro

Prezentare generala a proiectului:

Proiectul se adreseaza unui grup heterogen de neoplazii hematologice - mieloproliferarile cronice - a caror patogeneza moleculara, cu exceptia leucemiei mieloide cronice, a fost putin inteleasa pana in prezent. Mutatia punctiforma JAK2 V617F, recent identificata, ce determina activarea constitutiva a Jak2 kinazei cu activarea cailor de semnalizare ulterioare, este considerata evenimentul genetic cheie la majoritatea pacientilor cu mieloproliferari maligne cronice. In acest context JAK2 devine o gena candidat promitatoare pentru descifrarea patogenezei unor maladii ca Policitemia vera (PV), Trombocitemia esentiala (TE) si Metaplazia mieloida cu mielofibroza (MMM). Obiectivul general al acestui proiect este reprezentat de diagnosticul molecular al mutatiei JAK2 V617F in mieloproliferarile cronice BCR/ABL negative din banca noastra de probe si stabilirea protocoalelor de detectie a acestei mutatii la pacientii Clinicii Hematologice Coltea si ai altor sectii de hematologie din tara. Pentru diagnosticul statusului homozigot sau heterozigot sunt propuse metode moderne cum ar fi secventierea, PCR cu specificitate alelica (allele-specific PCR), analiza situsului de restrictie (restriction PCR) si TaqMan PCR cantitativ. Celulele provenite de la pacienti cu sindrom mieloproliferativ cronic (SMP) BCR/ABL negativ, pozitivi sau negativi pentru JAK2 V617F vor fi examinate in ce priveste diferentierea si raspunsul la citokine in teste de clonogenicitate, iar pacientii negativi pentru mutatie vor fi investigati pentru alte anormalitati genetice utilizand metode de biologie moleculara si teste citogenetice moderne (FISH cu sonde locus-specifice, centromer-specifice si cromozom-specifice). Studiul longitudinal al probelor de la pacientii cu SMP BCR/ABL negativ va fi deosebit de important pentru identificarea ulterioara a evenimentelor genetice sau epigenetice care ar putea fi responsabile de evolutia PV, TE si MMM pana la Leucemie Acuta Mieloblastica (LAM).
Studiile ce vor fi realizate pe parcursul acestui proiect sunt esentiale pentru implementarea in Romania a metodelor avansate de diagnostic molecular care sa permita integrarea echipelor de cercetare in proiectele Programelor Cadru ale Uniunii Europene. Institutiile implicate, Institutul de Cercetare si Dezvoltare "Victor Babes", Universitatea de Medicina si Farmacie "Carol Davila", Clinica de Hematologie a Spitalului Coltea si Institutul de Virusologie "Stefan S. Nicolau", formeaza o echipa excelenta care poate, prin acest proiect, sa avanseze nivelul investigatiei moleculare si celulare in sindroamele mieloproliferative.

REZULTATE OBȚINUTE PÂNĂ ÎN PREZENT:

Activitatile desfasurate in parteneriat in cadrul proiectului au permis alcatuirea grupurilor de pacienti cu sindroame mieloproliferative cronice, stabilirea algoritmilor de investigatie hematologica si genetica, crioprezervarea de material biologic de la pacientii inclusi in studiu, optimizarea metodelor de lucru, studiul citogenetic si molecular al fuziunii BCR/ABL, investigarea mutatiei JAK2V617F .
Etapele parcurse in cadrul proiectului sunt:
-  caracterizarea clinica si hematologica;
-  investigatia citogenetica;
-  crioprezervarea de material biologic;
-  studiile de hibridizare fluorescenta in situ (FISH);
- aplicarea metodologiilor RT-PCR (Revers-Transcriere si PCR) pentru detectia transcriptului de fuziune BCR/ABL;
-  metodologii PCR cu specificitate alelica pentru investigarea mutatiei JAK2V617F;
- secventierea, PCR cu specificitate alelica (allele-specific PCR), analiza situsului de restrictie (restriction-PCR) si Quantitative Real-Time PCR cantitativ pentru diagnosticul statusului homozigot sau heterozigot al mutatiei.  
Metodologiile moleculare de studiu a mutatiei JAK2V617F sunt aplicate pacientilor cu mieloproliferari cronice BCR/ABL negative, selectati prin investigatii hematologice, citogenetice si moleculare. Pacientii negativi pentru mutatia JAK2V617F vor fi investigati pentru alte anomalii genetice utilizand metode de biologie moleculara si teste citogenetice moderne (FISH cu sonde locus-specifice, centromer-specifice si cromozom-specifice). Stocarea celulelor din sangele periferic si maduva osoasa de la pacientii cu sindroame mieloproliferative contribuie la dezvoltarea bancii de celule tumorale si acizi nucleici.

DISEMINAREA INFORMAȚIILOR OBȚINUTE:

  1.  Participare la a 6-a Conferinta Europeana de Citogenetica Umana, Istanbul, iulie 2007 cu o lucrare originala prezentata sub forma de poster:

"Cytogenetic and molecular study of BCR/ABL negative chronic myeloproliferative disorders: preliminary data." M. E. Hinescu,  A. Arghir, G. Cardos, C. Diaconu, M. Chivu, L. Dragomir, M.Closca, A. Lupu, D. Mut-Popescu, A. Lungeanu.
Rezumatul lucrarii a fost publicat in Chromosome Research, vol.  15, nr. 1, p.  206.

  1. Participare la Conferinta Societatii de Genetica Medicala, Cheile Gradistei, mai 2007 cu urmatoarele comunicari orale:

1.  Entitati moleculare implicate in patogeneza mieloproliferarilor cronice maligne
Philadelphia negative. G. Cardos, A. Arghir, G. Chelu si A. Lungeanu.
2. Citogenetica moleculara in diagnosticul si monitorizarea hemopatiilor maligne - aplicatii si rezultate. A. Arghir, G. Cardos, G. Chelu si A. Lungeanu.

 

  1. Publicatii:

"News in cytogenetic and molecular diagnosis TEL-JAK-2 fusion as a model for hybrid oncogenes." Anca Roxana LUPU, Mihaela CLOSCA GHEORGHIU, Oana CIOCAN, Anca CIOBANU, Aurora ARGHIR, Agripina LUNGEANU. MADICA - a Journal of Clinical Medicine 2006; 1(3): 46-53.