Proiect 91/1/2006
Denumire modul I
Titlu Celule stem hepatice fetale umane - caracterizare și condiționare în vederea transplantului celular, Popescu LM
Responsabil de proiect Acad. Laurentiu M. Popescu
Institutia coordonatoare

UNIVERSITATEA DE MEDICINĂ ȘI FARMACIE „CAROL DAVILA”

Date de contact genetica@vbabes.ro

Prezentare generala a proiectului:

Celulele stem hepatice fetale umane (HFHSC) sunt importante pentru potentialul lor terapeutic: in urma transplantarii pot favoriza remisia insuficientei hepatice acute de diferite etiologii. Exista cateva incercari de a studia grefarea acestora in ficatul animalelor, dar este raportat un singur caz, de transplantare reusita, dar mai degraba empirica a HFHSC la o persoana adulta, urmat de o remisie spectaculoasa a insuficientei hepatice. Totusi, succesul clinic nu este inteles in detaliu si HFHSC nu au fost pe deplin caracterizate. Intentionam sa studiem HFHSC prin izolarea lor din ficatul fetal uman, obtinut din avorturi spontane si terapeutice, la diferite varste gestationale, conform normelor legale si etice; celulele vor fi sortate pe baza fenotipului prin separare cu bile magnetice; se vor initia culturi de HFHSC in conditii bazale si in prezenta factorilor de crestere (EGF, HGF, SCF), a citokinelor (TGFß) si a elementelor de matrice extracelulara (colagen, laminina, fibronectina si matrigel), determinandu-se influenta acestora asupra diferentierii si proliferarii celulare. Proliferarea celulara va fi evidentiata pe baza expresiei markerilor de proliferare (Ki67, PCNA), iar diferentierea celulara va fi studiata pe baza expresiei markerilor hepatocitari (AFP, albumina, CK, GGT), in comparatie cu markerii tipici pentru celule stem ca CD117, CD 90, CD34, c-Met, prin imunofluorescenta cantitativa, microscopie confocala, citometrie de flux. HFHSC vor fi fenotipate si cariotipate la diferite pasaje pentru a stabili care este populatia cea mai adecvata pentru transplant. Va fi investigata conditionarea HFHSC prin co-cultivare cu fibroblaste fetale umane. Se va investiga si prezenta puntilor intercelulare (inclusiv nanotubuli), presupusa a fi o trasatura comuna celulelor stem si celulelor canceroase, in scopul de a deslusi transformarea maligna a celulelor stem demonstrata in tumorile hepatice umane (hepatocarcinom), dar si in manipularea experimentala a celulelor stem (culturi, transplant pe modele animale). Celule selectionate marcate prin transfectie cu o proteina fluorescenta (GFP) vor fi transplantate prin infuzie peritoneala sau injectare in vena porta in ficatul animalelor, apoi va fi investigata grefarea celulelor. Celulele vor fi testate din punct de vedere al integritatii moleculare si absentei infectiilor bacteriene, virale sau fungice prin metode standardizate. HFHSC conditionate si controlate se pot dovedi a fi cea mai buna solutie pentru terapia celulara a insuficientei hepatice.